Публикации >
мелкие домашние животные > Коррекция иммунодефицитного состояния, вызванного циклофосфаном, с помощью пероральной формы полипренилфосфата
Коррекция иммунодефицитного состояния, вызванного циклофосфаном, с помощью пероральной формы полипренилфосфата
Санин А.В., Наровлянский А.Н., Пронин А.В., Кожевникова Т.Н., Санина В.Ю., Виденина А.А., Саличев А.В.*, Ожерелков С.В.* ФГБУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им.Н.Ф.Гамалеи Минздравсоцразвития РФ
*Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН
Полипренилфосфат натрия – основной действующий компонент Фоспренила – иммуномодулятора с противовирусной активностью, давно и успешно применяющегося в ветеринарной медицины при самых различных патологиях (3). Возможные механизмы индукции раннего противовирусного процесса в организме под влиянием фоспренила могут быть связаны с активацией ряда звеньев врожденного иммунитета, обеспечивающих повышение неспецифической резистентности. В частности, фоспренил активирует продукцию ключевых цитокинов, обеспечивающих сбалансированное формирование эффективного протективного иммунного ответа при вирусном инфекционном процессе (2). Описана также коррекция вирус- и стресс-индуцированной иммуносупрессии у мышей с помощью фоспренила.
В настоящей работе изучали влияние полипренилфосфата натрия в составе препарата «ДоброГрызя» на экспериментальный иммунодефицит, вызванный у мышей введением циклофосфана.
Материалы и методы.
Животные: использовали мышей линии Balb\c массой 18-20 г, полученных из питомника «Столбовая» РАМН
Препарат: В качестве источника полипренилфосфата натрия использовали препарат «Добро-Грызя» (ДГ) производства ООО "ГамаВетФарм". Таблетки, содержащие 0,25 мг полипренилфосфата, измельчали до порошкообразного состояния и размешивали в тёплой стерильной дистиллированной воде для инъекций. Растворённые таблетки давали мышам перорально из расчёта – 2 таблетки/мышь в объёме 1 мл (животных выпаивали при помощи пипетки с насадкой дробно: дважды в день по 0,5 мл ежедневно в течение 7-и дней).
Контрольные животные получали в том же объёме стерильную дистиллированную воду для инъекций, не содержащую препарата.
Индукция иммунодефицитного состояния. Мышам за 24 часа до иммунизации эритроцитами барана внутрибрюшинно однократно вводили циклофосфан (ЦФН) в дозе 1 мг/мышь в объёме 0,5 мл.
Определение числа антителообразующих клеток (АОК) производили по методу Jerne N.K., Nordin A.A. (5).
Животным за 4 суток до опыта вводили внутривенно по 0,5 мл физиологического раствора с 5 х 108 эритроцитами барана (ЭБ), трижды промытыми физиологическим раствором.
Перед опытом готовили 0,7% раствор агарозы типа ** («Сигма», США) на растворе Хенкса, рН которого был доведён до 7,2 с помощью 0,1 н раствора NaOH. Навеску агарозы заливали раствором Хенкса и доводили его до кипения. После растворения агарозы раствор фильтровали через вату, охлаждали его до температуры + 42°С и добавляли к нему эритроциты барана из расчёта 0,5 мл осадка эритроцитов на 100 мл агарозы. Полученную суспензию разливали по бактериологическим пробиркам (по 2,5 мл на пробирку). В каждую пробирку добавляли по 106 спленоцитов, полученных от иммунных животных в объёме 0,1 мл. Суспензию быстро перемешивали и выливали в чашку Петри, добиваясь её равномерного растекания по дну чашки. Чашки охлаждали 10 минут на ровной поверхности до затвердевания агарозы и затем инкубировали 1,5 часа в термостате при + 37°С.
После окончания срока инкубации в каждую чашку добавляли по 3 мл комплемента морской свинки, приготовленного из лиофилизированного препарата (Московский НИИВС им. И.И.Мечникова) путём добавления в ампулу 2 мл физиологического раствора. Чашки Петри инкубировали ещё 1 час при + 37°С (через 30 минут их переворачивали на 180°). Через 1 час комплемент сливали и просчитывали число зон гемолиза.
Исследовали количество АОК у следующих группы мышей (по 10 особей в каждой):
1) интактные контрольные (содержавшиеся в стандартных условиях) – получавшие ЭБ без предварительного выпаивания и введения ЦФН ;
2) животные, которым вводили ЦФН без предварительного выпаивания;
3) мыши, которых выпаивали «ДоброГрызей» по схеме, представленной выше, на 8-е сутки вводили ЦФН, затем инъецировали ЭБ;
4) животные, которых в течение 7-и суток выпаивали водой, на 8-е сутки вводили ЦФН, затем иммунизировали ЭБ;
Таблица
Коррекция иммунодефицитного состояния, вызванного введением циклофосфана у мышей линии Balb/c, при помощи препарата «ДоброГрызя»
| Группа мышей | Условия эксперимента: животным вводили (+/–) | Число АОК (на 1 млн.клеток) |
| Циклофосфан | ДГ | ЭБ |
| 1 | – | – | + | 68 ± 4,5* |
| 2 | + | – | + | 25 ± 2,1 |
| 3 | + | + | + | 57 ± 4,3 |
| 4 | + | – | + | 19 ± 2,9** |
* – разница между показателями статистически достоверна (при р ≤ 0,05) между группами 1 и 2; 2 и 3; 3 и 4; ;
**– разница между показателями статистически недостоверна (при р > 0,05) между группами 1 и 3; 2 и 4;
Как видно из представленных данных, ДГ вызывала статистически значимое восстановление количества АОК, подавленного после введения мышам ЦФ. С учетом ранее полученных данных о том, что ДГ способствует существенному повышению резистентности мышей к экспериментальной вирусной инфекции (4), мы заключаем, что препарат «ДоброГрызю» (а также аналогичные ей – «ДоброПёсу» и «ДоброКотю») можно рассматривать как перспективную форму фоспренила для перорального применения.
Выводы:
1. Полипренилфосфаты в составе ДоброГрызи способствуют коррекции экспериментального иммунодефицита у мышей , вызванного введением циклофосфана.
2. Препараты ДоброГрызя, ДоброПёса и ДоброКотя можно рассматривать как перспективную форму фоспренила для перорального применения.
Литература
1.Ожерелков С.В., Кожевникова Т.Н. Коррекция вирус- и стресс-индуцированной иммуносупрессии у мышей с помощью фоспренила. Ветеринарная клиника 2005 N7. с.26-27.
2. Пронин А.В., Ожерелков С.В., Наровлянский А.Н., Данилов Л.Л., Мальцев С.Д., Деева А.В., Григорьева Е.А., Санин А.В. Роль цитокинов в иммуномодулирующих эффектах фосфатов полипренолов – противовирусных препаратов нового поколения. Russian J. Immunol., 2000, V.5, N 2, p. 155-164.
3.А.В.Санин, А.Н.Наровлянский, С.В.Ожерелков, А.В.Пронин, В.Ю.Санина. Иммуномодуляторы в ветеринарной практике – применение и противоречия. Ветеринарная клиника. 2008 №№10-12.
4.А.В.Санин, Т.Н.Кожевникова, А.А.Виденина, С.В.Ожерелков. Влияние препарата «ДоброГрызя» на резистентность мышей к вирусной инфекции в эксперименте. Ветеринарный доктор 2011 №9, с.4
5.Jerne N.K., Nordin A.A. Plaque formation in agar by single antibody producing cells. Science.– 1963.– V.140, N. 3565. – P. 405–407.
